LA DOTTORESSA VERNON RAGIONA SUI RISULTATI PUBBLICATI DA
LA DOTTORESSA VERNON RAGIONA SUI RISULTATI PUBBLICATI DA
’RETROVIROLOGY’.
DI Giada Da Ros, presidente della CFS Associazione Italiana di Aviano
(PN)
Recentemente
la rivista ’Retrovirology’ ha pubblicato un articolo che non trova
alcun collegamento fra il retrovirus XMRV e la CFS/ME. ’ il secondo
studio che arriva a questa conclusione, e mentre preparavamo la
traduzione ne ’ arrivato anche un terzo pubblicato sul British Medical
Journal e relativo a pazienti dei Paesi Bassi .
La dottoressa
Suzanne D. Vernon, PhD, che ha ottenuto il dottorato in virologia dalla
University of Wisconsin a Madison, ha lavorato del campo della ricerca
sulla salute pubblica rispetto alle malattie infettive ai CDC di
Atalnta ed ’ dal 2007 direttore scientifico della CFIDS Association of
America, ha buttato già alcune riflessioni che trovate sotto tradotte.
Nell’originale trovate anche i riferimenti bibliografici.
Secondo Studio Negativo Sull’XMRV: Ancnra in Cerca di uno Studio di
Replicazione Corretto e Robusto.
Un
secondo studio che ha cercato l’XMRV nella CFS ne ’ uscito a mani
vuote. Il 15 Febbraio, 2010, autori del Regno Unito (UK), hanno
pubblicato un articolo sulla rivista specializzata ad accesso libero
Retrovirology intitolato ’Assenza del virus xenotropico murino
imparentato al virus della leucemia nei pazienti del Regno Unito con la
sindrome da fatica cronica’. Questi investigatori hanno usato metodi
quantitativi e sensibili per cercare l’XMRV nei campioni di sangue
raccolti dai pazienti con la CFS, donatori di sangue sani e pazienti
clinici con altre patologie. Hanno anche cercato anticorpi che
potrebbero bloccare l’XMRV dall’infettare le cellule nella porzione
liquida del sangue (siero e plasma) della CFS e dei controlli.
Prima
di arrivare ai dettagli dell’articolo, guardiamo al gruppo che ha dato
notizia di questi risultati. L’investigatore leader, il dottor Harriett
CT Groom, e tre altri autori sono del dipartimento di virologia del
Medical Research Council National Institute for Medical Research,
l’equivalente dell’Istituto Superiore di Sanit’ per gli Stati Uniti.
Uno di questi investigatori, il dottor Jonathan Stoye, ’ stato il
co-autore dell’editoriale in Science che accompagnava la notizia di
Lombardi e gli altri che per la prima volta ha stabilito
un’associazione fra XMRV e CFS. Il dottor Stoye ’ un retrovirologo noto
in tutto il mondo. Quattro autori sono del gruppo della CFS alla St.
George’s University di Londra, compreso il dottor Jonathan Kerr, meglio
conosciuto per la sua ricerca che descrive gli aspetti genomici e
infettivi della CFS. Il dottor Kerr ’ anche co-investigatore grazie
alla borsa di ricerca del Whittemore Peterson Institute finanziata
dell’Istituto Superiore di Sanit’ (Americano). Due autori, incluso il
dottor John Gow, sono della Caledonia University di Glasgow, in Scozia.
Il dottor Gow ha un lunga documentata serie di pubblicazioni nella
ricerca sulla CFS. Due altri autori vengono dal Barts e dal London
National Health Service Trust e dal University College di Londra.
Ciascuno dei loro contributi a questo studio ’ descritto alla fine
dell’articolo.
ABC sul sangue:
Globuli rossi (eritrociti): Contengono emoglobina e aiutano a
distribuire ossigeno alle cellule
Globuli bianchi (leucociti): svolgono le funzioni del sistema
immunitario.
Piastrine (trombociti): Svolgono funzione di coagulazione e impediscono
ai batteri di entrare nelle cellule.
Plasma:
Rappresenta circa il 55% del fluido del sangue ed ’ composto da acqua,
piastrine e globuli. Se estrai le proteine coagulanti dal plasma,
questo viene chiamato siero.
Ci sono molti differenti metodi
usati per raccogliere, conservare e trattare i campioni di sangue. I
componenti del sangue possono essere testati per cose differenti, e
test per differenti componenti del sangue possono produrre risultati
differenti quando testati per la stessa cosa. Tutti questi
fattori devono essere presi in considerazione nello
standardizzare i test del sangue nel tempo, dallo stesso laboratorio e
attraverso diversi setting di laboratorio. Nella ricerca, ’
pratica comune usare campioni raccolti e conservati nel tempo;
tuttavia, variazioni nel protocollo della conservazione del trasporto e
del trattamento devono essere considerati nella analisi dei dati e
nelle conclusioni.
Questo studio includeva tre diversi gruppi:
1.
St. George’s University di Londra (SGUL): Questo gruppo era formato da
142 pazienti adulti con la CFS e 157 donatori di sangue sani dal Gruppo
CFS della Divisione di Medicina Cellulare e Molecolare. Questi soggetti
avevano dai 18 ai 65 anni. I campioni di sangue, che contenevano sia
frazioni di cellule che di liquido, erano stati raccolti fra 1,5 e 4
anni dalla diagnosi.
2. Barts e il London National Health
Service Trust (BLT): Questo gruppo era costituito da 226 campioni di
siero presi nel 2008 e nel 2009. Cinquantasette sono stati ottenuti da
pazienti nella clinica prenatale; 58 sono stati presi da pazienti con
patologie del sangue; 55 venivano da pazienti con problemi al fegato;
55 venivano da pazienti con problemi al fegato dalla clinica per
problemi ai reni. Tutti questi campioni sono stati usati come campioni
di controllo.
3. Glasgow Caledonian University (GC): Questo gruppo
era costituito da 28 pazienti con la CFS (20 campioni di siero e 3 di
plasma) e 12 controlli (8 campioni di siero e 4 di plasma). I pazienti
con la CFS avevano fra 28 e 79 anni e i campioni sono stati raccolti
fra il 1995 e il 2003.
Gli autori riportano che tutti I pazienti
con la CFS incontravano I criteri di definizione della CFS (Fukuda), ma
non c’erano altre dichiarazioni sulle caratteristiche di quei pazienti
in termini di gravità della malattia di altri marker clinici. Il gruppo
di pazienti, essendo costituito da pazienti da diversi centri non ’
specifico di questo studio; i campioni dai pazienti con la CFS usati
nello studio pubblicato su Science sono stati raccolti dagli ambulatori
di diversi medici in varie regioni, secondo le informazioni che si
trovano sul sito web del Whittemore Peterson Institute.
Gli
investigatori guidati dal dottor Groom hanno reso noti diversi tipi di
esperimenti nell’articolo di Retrovirology. Hanno usato metodi della
reazione della catena della polimerasi (PCR) identici a quelli di
cui hanno riportato Lombardi e gli altri nell’articolo di Science,
eppure non sono stati in grado di individuare l’XMRV nei campioni dai
campioni dell’ SGUL. Hanno poi sviluppato un test quantitativo PCR
differente, ma molto sensibile, che potesse individuare addirittura
solo 16 copie di DNA dell’XMRV. Eppure di nuovo non c’era prova di
acidi nucleici dell’XMRV nei campioni dell’SGUL. Hanno usato una
tecnica apposita chiamata ’spiking’ (pungolamento) per mostrare che nei
campioni non c’era nulla che impedisse che l’XMRV si amplificasse.
Gli
anticorpi neutralizzanti impediscono che i virus entrino nella cellula,
’neutralizzando’ perci’ l’infezione. Groom e gli altri hanno cercato
prova di anticorpi neutralizzanti nel siero o nel plasma preso dai
pazienti e dai controlli sani. Hanno trovato che 26 (4.6%) dei 565
campioni di siero potevano neutralizzare l’XMRV, impedendogli di
entrare nelle cellule. Tuttavia, solo uno dei 26 era siero ottenuto da
un paziente con la CFS. La maggior parte di questi erano pure in grado
di neutralizzare la risposta a virus simili, cosa che indica una
significativa reattività incrociata nelle risposte sierologiche.
Lo
studio di Retrovirology ha trovato prova di XMRV individuando
anticorpi specifici nei campioni presi dai soggetti di studio, cosa che
dimostra che l’XMRV non ha contagiato le persone. Ma come l’altro
studio condotto nel Regno Unito di cui si parlava in PLoS ONE, questo
studio non ha individuato un più alto livello di XMRV nelle persone con
la CFS. Perch’? La tecnica di PCR usata nell’articolo era identica a
quella nell’articolo di Science e altri metodi che hanno usato
potevano essere considerati migliori e più sensibili. Gli anticorpi
usati dai due laboratori erano differenti, tuttavia. Questi
investigatori non hanno testato altrettanti campioni di sangue di
controlli sani (157 nel gruppo SGUL) rispetto a quando hanno fatto
quelli dell’articolo di Science (218 controlli sani), che ha trovato
XMRV nel 3,7% dei controlli sani. (La fonte dei campioni dei controlli
sani non era descritta nell’articolo di Science). Forse la cosa
più importante ’ che questo studio di Retrovirology ha fatto il test
per l’XMRV a donatori di sangue sani; i donatori di sangue vengono
sottoposti a visita medica per molte cose ed ’ probabile che siano un
gruppo molto più sano dei controlli ottenuti dalla popolazione
generale. L’inclusione del gruppo di comparazione BLT di
individui con altre condizioni ’ nuovo di questo studio.
Perch’
non ’ stato trovato DNA dell’XMRV nei campioni con la CFS? Una
differenza fra i pazienti con la CFS selezionati per il gruppo SGUL e
quelli testati nello studio di Science potrebbe essere la severit’ e la
durata della malattia. I campioni di sangue del gruppo CFS dello SGUL
sono stati presi in tempi relativamente recenti nel corso della
CFS (1-4 anni). I pazienti con la CFS nello studio di Science
erano severamente malati oltre ad avere disfunzioni immunitarie,
sebbene le specifiche caratteristiche non siano state rese note.
Potrebbe semplicemente essere che i pazienti con la CFS nel gruppo SGUL
non fossero comparabili (ad esempio, malati così a lungo) a quelli
studiati nell’articolo di Science. Tuttavia, la reputazione del dottor
Kerr e la sua esperienza nella ricerca sulla CFS/ME, insieme alla sua
recente collaborazione con il the Whittemore Peterson Institute,
suggerisce che si sarebbe preso cura di usare criteri di selezione
similari nel suo progetto di studio. (E’ messo in nota nei
riconoscimenti che ’JK’ ’ Jonathan Kerr ’ era uno dei tre autori
che hanno progettato lo studio).
Ma se l’XMRV ’ in grado
di contagiare le persone ’ come mostrato da questo articolo,
nell’articolo di Science e negli articoli sul cancro alla prostata ’
non dovrebbero gli esperti essere in grado di individuare o trovare
anticorpi nel sangue? Non necessariamente. I virus hanno bisogno di
sopravvivere. Il modo migliore per loro di farlo ’ adattarsi all’ospite
in modo tale da potersi preservare. Rimanere a livelli molto bassi ’ un
modo di evitare di venire individuati dal sistema immunitario in modo
da sopravvivere. Sebbene il dottor Groom e i suoi colleghi abbiano
sviluppato un test PCR sensibile e quantitativo, l’XMRV potrebbe essere
in grado di nascondersi a meno di 16 copie (il limite di sensibilità in
questo studio), o potrebbe non essere presente nelle cellule del sangue
dei pazienti con la CFS che stanno male da meno tempo. Un altro trucco
che i virus usano ’ sabotare la risposta immunitaria. In un elegante
studio pubblicato su Proceedings of the National Academy of Sciences
nel febbraio 2010, investigatori francesi hanno mostrato che i
retrovirus, incluso l’XMRV, contengono un dominio immunosoppressore
(ISD) nelle proteine dell’envelope. L’envelope ’ la porzione esteriore
del virus cio’ quella porzione che si suppone che la risposta
immunitaria riconosca. Questo ISD permette al virus di infettare le
cellule ma in qualche modo ’ e questo meccanismo non si capisce ’
impedisce al corpo di montare una risposta immunitaria e di sviluppare
anticorpi nautralizzanti contro il virus. Questo ’trucco’ dei virus
appena scoperto potrebbe spiegare perché così pochi campioni di siero
avevano anticorpi neutralizzanti dell’XMRV negli esperimenti descritti
nello studio di Retrovirology. L’elevata gamma di anticorpi dell’XMRV
descritti nell’articolo di Science potrebbe spiegare la reattività
sierologia incrociata. Ci sono casi noti in cui il sistema immunitario
viene in contatto con un agente complesso come un virus e stimola
reazioni multiple a parti del virus e ad altre molecole.
Allora, che cosa ci vuole per avere un corretto e robusto studio di
replicazione?
Intensa
attenzione al dettaglio. Poich’ la selezione dei pazienti ’ stata un
potenziale fattore di confusione nei due studi negativi, la comunità
scientifica deve capire le caratteristiche cliniche dei pazienti con la
CFS che erano positivi all’XMRV nell’articolo di Science. La CFS ’ una
malattia cronica eterogenea con molti possibili sottotipi, ciascuno
reso ancor più complesso da co-malattie comuni come la Sindrome
dell’Intestino Irritabile, la fibromialgia e la depressione. La
mancanza di sottotipi universali e di criteri di organizzazione sulla
severit’ e sulla durata della malattia, rendono le comparazioni una
sfida. Molti pazienti con la CFS vengono sottoposti a una varietà di
trattamenti in modo da ricevere sollievo da questa debilitante
malattia. I trattamenti, specialmente quelli che direttamente agiscono
sul sistema immunitario, possono anche avere effetto sul ciclo di vita
dell’XMRV e sulla individuazione del virus.
La standardizzazione
dei metodi di analisi pure deve progredire. Come abbiamo riportato in
gennaio, il Gruppo di Lavoro sulla Ricerca Scientifica dell’XMRV nel
Sangue del Dipartimento americano di Salute e Scienze Umane sta
sviluppando pannelli analitici che permetteranno a laboratori multipli
di standardizzare i metodi per ottimizzare l’individuazione sensibile
del DNA provirale dell’XMRV e dell’RNA virale. Una volta che i metodi
sono standardizzati, questi stessi laboratori hanno intenzione di
testare gruppi codificati di campioni di sangue ottenuti primariamente
da donatori sani e da pazienti con la CFS che sono stati indicati come
positivi dall’XMRV.
Finch’ i metodi non sono standardizzati e alla
comunità scientifica non viene fornita informazione rispetto alle
specifiche caratteristiche dei soggetti con la CFS (e dei controlli)
che sono risultati positivi nello studio di Science, siate preparati a
leggere di altri studi negativi. Si spera che gli investigatori di
Science rendano disponibili queste informazioni prima che l’interesse
nell’XMRV associato alla CFS si affievolisca e diventi un altro ancora
dei tentativi frustrati di risolvere la CFS. Raggiungere il consenso
scientifico nel ruolo dell’XMRV nella CFS richiede più ricerca e
maggiore collaborazione, così come ’ necessario quando vengono fatte
molte altre importanti scoperte.
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